1. Vaško panardinimas
Skaidrus audinys turi būti vaškas, kad skaidrizuojantis agentas (pvz., Ksilenas) pakeistų parafino vašku, kad parafino vaškas galėtų prasiskverbti į audinį ir suteikti palaikymą vėlesniam pjaustymui.
Veikimo veiksmai: Įdėkite skaidomą audinį į ištirpintą parafino vašką, paprastai maždaug 60 laipsnių, kad parafino vaškas galėtų visiškai prasiskverbti į audinį.
Pastabos: vaško panardinimo laiką reikia koreguoti atsižvelgiant į audinio dydį ir tipą, paprastai 1-2 valandas.
2. Pjaustymas
Vaško impregnuotą audinį reikia supjaustyti, kad būtų galima dažyti ir stebėti.
Veikimo veiksmai: Norėdami supjaustyti audinį į plonas riekeles, paprastai pjaustykite pjaustyklę, paprastai 4-6 mikronų storio.
Pastabos: įsitikinkite, kad ašmenys yra aštrūs, kai pjaustant, kad išvengtumėte audinio ašarojimo ar deformacijos.
3. Dažymas
Po pjaustymo reikalingas dažymas, kad skirtingos audinio dalys būtų skirtingos spalvos, kad būtų lengviau stebėti mikroskopą.
Veikimo veiksmai: įdėkite riekeles į dažymo tirpalą. Įprasti dažymo metodai yra hematoksilino-eozino dažymas (H&E dažymas).
Pastabos: dažymo laikas turi būti sureguliuotas pagal dažymo metodą ir audinių tipą, kad būtų išvengta dažymo per tamsiu ar per lengvas.
4. Sandarinimas
Po dažymo riekeles reikia uždaryti, kad būtų apsaugota griežinėliai ir palengvintų mikroskopinį stebėjimą.
Veikimo veiksmai: naudokite sandarinimo tirpalą, kad pritvirtintumėte skaidrės skilteles, tada uždenkite jas dangteliais.
PASTABOS: Venkite burbuliukų generavimo sandarinimo ir įsitikinkite, kad sandarinimo tirpalas tolygiai uždengia griežinėlius.
5. Vaizdas ir stebėjimas
Po sandarinimo pjūvius galima atvaizduoti ir stebėti naudojant mikroskopą.
Veikimo veiksmai: Užklijuokite užklijuotus griežinėlius po mikroskopu, sureguliuokite fokusavimą ir ryškumą bei stebėkite ir fotografuokite.
Pastabos: Stebėjimo proceso metu atkreipkite dėmesį į mikroskopo padidinimo ir diafragmos reguliavimą, kad gautumėte geriausią stebėjimo efektą.
